液相色谱柱的选择与清洁说明
点击次数：1268 更新时间：2020-05-12
液相色谱柱的液相色谱(HPLC)技术是20世纪60年代后期发展起来的一种分离分析技术，是现代分离和测定的重要手段。自问世以来，它以其分离效率高、分析速度快、检测灵敏度高、沸点高但不能汽化热不稳定的生理活性物质等优点，在生物化学、医学和临床分析等领域得到了广泛的应用。液相色谱柱作为一种消耗品，随着使用时间的延长或注射次数的增加，色谱峰高减小，峰宽增大或肩峰出现，柱效应减小。需要定期进行*的清洗和再生，并且不同的柱清洗方法也不同。如C8柱、C18柱的清洗：
液相色谱仪常用的C8柱、C18柱。当流动相仅为乙腈-水或甲醇-水时，流速1.0ml/min冲洗30min，，柱温保持实验时的温度。
水相中有无机盐、表面活性剂或三乙胺、高氯酸等物质时，先采用纯水(或含有2%甲醇)，冲洗A管路(实验中采用的管路)，时间30min(如流动相中有表面活性剂，则适当增加时间)，流速1.0ml/min，柱温可较实验温度高出5~10℃。随后更换成20%甲醇再冲洗30min，流速不变，柱温箱加热装置关闭。结束后取下色谱柱放置阴凉处。
实践证明没必要采用高比例的甲醇冲洗，因为残余有机相中的水相遇到高比例甲醇后在泵头上、色谱柱中会析出少量盐和表面活性剂，导致色谱柱寿命缩短。
对于液相色谱柱的选择要注意：
1.PH值使用范围
硅胶为基质填料，使用时一定要注意流动相的PH范围。一般的C18柱PH值范围都在2-8，流动相的PH值小于2时，会导致键合相的水解；当PH值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。一旦发生上述情况，色谱柱入口处会塌陷。同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。如果流动相PH较高或经常使用缓冲液时，建议选择PH范围大的柱子。
2.填料的端基封尾
把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾，可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分离；填料稳定性好了，组分的保留时间重现性就好。如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物，选用填料经端基封尾的色谱柱。
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